PMA（Phorbol 12-myristate 13-acetate）是一種廣泛用于體內(nèi)外實驗的佛波酯（phorbol ester）類PKC激活劑。在使用PMA時，稀釋是一個非常重要的步驟，因為正確的稀釋可以確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。

初始溶解：通常，PMA先用DMSO溶解成1 mg/mL的儲存液。這個濃度相對較高，便于后續(xù)的稀釋操作

分裝保存：將1 mg/mL的PMA儲存液分裝到EP管中，每管10 μL，保存在-20°C。這樣可以避免反復(fù)凍融對PMA活性的影響

工作濃度稀釋：在使用時，根據(jù)實驗需要，用PBS或其他適當(dāng)?shù)木彌_液將PMA稀釋到所需的工作濃度。例如，如果需要160 nmol/L的PMA，可以先計算出所需的稀釋倍數(shù)，進行稀釋

假設(shè)你有1 mg/mL的PMA儲存液，需要稀釋到160 nmol/L的工作濃度。需要將濃度單位統(tǒng)一：

1 mg/mL = 1000 μg/mL

PMA的分子量約為616.83 g/mol，1 μg PMA約為1.62 μmol（1/616.83）。

1 mg/mL的PMA儲存液相當(dāng)于1.62 mM（1.62 × 10^-3 M）。

要從1.62 mM稀釋到160 nmol/L（0.16 μM），稀釋倍數(shù)為：

[ \text{稀釋倍數(shù)} = \frac{1.62 \times 10^{-3} \text{ M}}{0.16 \times 10^{-6} \text{ M}} = 10125 ]

需要將PMA儲存液稀釋10125倍才能得到160 nmol/L的工作濃度。

在稀釋過程中，隨著稀釋倍數(shù)的增加，誤差也會隨之增加。某些標(biāo)準(zhǔn)中會有逐級稀釋到多少濃度的規(guī)定，或者每次稀釋的倍數(shù)不能超過20倍的明確規(guī)定。為了減少誤差，可以采用逐級稀釋的方法，逐步達(dá)到所需的工作濃度。

PMA常用于刺激免疫細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子，通常與離子霉素（Ionomycin）聯(lián)合使用。在實驗中，PMA的推薦使用濃度為0.1-10 μM。具體步驟如下：

試劑準(zhǔn)備：

Ionomycin：0.5 mg/mL用純乙醇配制，分裝保存。

PMA：0.1 mg/mL用DMSO配制，分裝保存。

細(xì)胞刺激：

收集細(xì)胞并計數(shù)，用新鮮培養(yǎng)基重懸至細(xì)胞密度為1-2 × 10^6 cells/mL。

加入PMA（10 ng/mL）和Ionomycin（1 μg/mL），混勻后在37°C、5% CO2培養(yǎng)4-6小時。

細(xì)胞處理：

根據(jù)實驗需求，選擇是否加入蛋白轉(zhuǎn)運抑制劑（如Monensin或Brefeldin A）。

離心收集細(xì)胞，進行流式細(xì)胞染色，檢測細(xì)胞因子表達(dá)情況（如IFN-γ、IL-2、TNF-α等）。

通過以上步驟，可以確保PMA的稀釋效果和實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。